HPLC使用注意事項(xiàng)

      1.流動(dòng)相必須用HPLC級(jí)的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45um或更細(xì)的膜過濾)。

      2.流動(dòng)相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。

      3.不能用純乙腈作為流動(dòng)相，這樣會(huì)使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。

      4.使用緩沖溶液時(shí)，做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí)，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)沖 洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對(duì)于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上。

      5.長時(shí)間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機(jī)相(如甲醇等)，因?yàn)榧兯组L霉。

      6.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。

      7.C18柱不能進(jìn)蛋白樣品，血樣、生物樣品。

      8.堵塞導(dǎo)致壓力太大，按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗。清洗方法：①以異丙醇作溶劑沖洗；②放在異丙醇中間用超聲波清洗；③用10％稀硝酸清洗。

      9.氣泡會(huì)致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。

      10.如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時(shí)，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進(jìn)行流動(dòng)相的清洗。

      11.要注意柱子的PH值范圍，不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。

12.更換流動(dòng)相時(shí)應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動(dòng)邊靖洗，然后插入新的 流動(dòng)相中。更換無互溶性的流動(dòng)相時(shí)要用異丙醇過渡一下。

13.峰形問題：按常規(guī)峰寬應(yīng)該在譜圖上從頭到尾以正常順序增加。峰不對(duì)稱性可能是多方面原因造成的：色譜系統(tǒng)、柱、進(jìn)樣程序、流路系統(tǒng)、樣品組成等，輕微的拖尾是正常的。分析拖尾應(yīng)從原因聯(lián)系考慮----用的什么色譜方法、樣品的結(jié)構(gòu)、流動(dòng)相組成和PH以及在分離條件下樣品是離子型或分子型。

表一、峰形的影響原因