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15022775827
一、實驗方法
Cometro高效液相色譜系統(tǒng)；
紫外檢測器波長：278nm；
Kromasil C18 250*4.6mm 5u 色譜柱；
柱溫：25℃；
流動相：0.025mol/L磷酸溶液（用三乙胺調(diào)pH=3.0）：乙腈=87:13；
流速：1.00ml/min；
諾氟沙星對照品-0.15mg/ml，樣品；
進樣量：對照品分別進樣5ul，7.5ul，10ul，12.5ul，15ul各3次，樣品進樣10ul，使樣品與標準品1:1混合再進樣10ul，考察線性相關性，保留時間重現(xiàn)性，回收率。
二、譜圖結(jié)果
附進樣量，保留時間，峰面積關系表：
進樣量 保留時間/min 峰面積/103 標準品5ul 10.533 728.12 標準品7.5ul 10.541 979.1 標準品10ul 10.528 1230.741 標準品12.5ul 10.524 1460.44 標準品15ul 10.401 1732.42 樣品10ul 10.517 1029.987 樣品標準品1比1混合10ul 10.213 1120.78
三、結(jié)果運算
1、保留時間重現(xiàn)性考察：
|
保留時間 |
10.533 |
10.541 |
10.528 |
10.524 |
10.401 |
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RSD |
0.5588% |
|||||
2、線性相關性考察及樣品含量計算：
以標準品進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，得線性方程：
由此可算出樣品中諾氟沙星含量0.1205mg/ml。
3、回收率考察：
根據(jù)上面線性方程可算出混合后樣品含諾氟沙星0.1342mg/ml，而實際真值是0.1352mg/ml，因此得回收率為99.20%。
四、綜述
1、此三項考察綜合考察了Cometro 6000 PVW UV/VIS檢測器的吸收穩(wěn)定性，Cometro 6000 LDI泵的流量性，進樣伐、進樣針的性，Kromasil色譜柱的性。
2、本實驗流動相中三乙胺看似作用是調(diào)節(jié)pH，其實際作用是調(diào)整峰型，因為諾氟沙星有含氮極性基團，在酸性環(huán)境中容易與色譜柱中的硅羥基產(chǎn)生靜電作用而拖尾，如下圖：
而三乙胺可以代替物質(zhì)與硅羥基作用，保證了物質(zhì)的峰型。因此調(diào)節(jié)pH時候得注意三乙胺的加入量，不能過少，可以直接加入適量三乙胺，再用磷酸調(diào)節(jié)pH。
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